深圳菲特立科技有限公司推出德國**微生物快速檢測系統RVLM ,可快速定量的檢測各類致病菌。詳情請登陸www.dghongao.com.cn 活菌總數;
大腸菌群;
大腸桿菌;
腸道桿菌科;
金黃色葡萄球菌;
綠膿桿菌;
沙門氏菌;
李斯特菌;
腸球菌;
亞硫酸鹽還原梭狀芽孢桿菌;
產氣莢膜梭菌;
霉菌(曲霉屬**、曲霉菌);
酵母菌。
前 言 本標準代替GB/T 4789.2-2008《食品衛生微生物學檢驗 菌落總數測定》。
本標準與GB/T 4789.2-2008相比，主要修改如下：
——修改了標準的中英文名稱；
——修改了菌落總數計算公式中的解釋；
——修改了培養基和試劑；
——刪除了**法 菌落總數PetrifilmTM 測試片法。
本標準的附錄A是規范性附錄。
本標準所代替標準的歷次版本發布情況為：
——GB 4789.2-1984、GB 4789.2-1994、GB/T 4789.2-2003、GB/T 4789.2-2008。
《食品微生物學檢驗 菌落總數測定》
1 范圍
本標準規定了食品中菌落總數（Aerobic plate count）的測定方法。
本標準適用于食品中菌落總數的測定。
2 術語和定義
2.1 菌落總數 aerobic plate count
食品檢樣經過處理，在一定條件下（如培養基、培養溫度和培養時間等）培養后，所得每g（mL）檢樣中形成的微生物菌落總數。
3 設備和材料
除微生物實驗室常規**及培養設備外，其他設備和材料如下：
3.1 恒溫培養箱：36 ℃±1 ℃，30 ℃±1 ℃。
3.2 冰箱：2 ℃～5 ℃。
3.3 恒溫水浴箱：46 ℃±1 ℃。
3.4 天平：感量為0.1 g。
3.5 均質器。
3.6 振蕩器。
3.7 無菌吸管：1 mL（具0.01 mL 刻度）、10 mL（具0.1 mL 刻度）或微量移液器及吸頭。
3.8 無菌錐形瓶：容量250 mL、500 mL。
3.9 無菌培養皿：直徑90 mm。
3.10 pH 計或pH 比色管或精密pH 試紙。
3.11 放大鏡或/和菌落計數器。
4 培養基和試劑
4.1 平板計數瓊脂培養基：見附錄A 中A.1。
4.2 磷酸鹽緩沖液：見附錄A 中A.2。
4.3 無菌生理鹽水：見附錄A 中A.3。
5 檢驗程序
菌落總數的檢驗程序見圖1。
圖
1 菌落總數的檢驗程序6 操作步驟
6.1 樣品的稀釋
6.1.1 固體和半固體樣品：稱取25 g 樣品置盛有225 mL 磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌均質杯內，8000 r/min～10000 r/min 均質1 min～2 min，或放入盛有225 mL 稀釋液的無菌均質袋中，用拍擊式均質器拍打1 min～2 min，制成1:10 的樣品勻液。
6.1.2 液體樣品：以無菌吸管吸取25 mL 樣品置盛有225 mL 磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌錐形瓶（瓶內預置適當數量的無菌玻璃珠）中，充分混勻，制成1:10 的樣品勻液。
6.1.3 用1 mL 無菌吸管或微量移液器吸取1:10 樣品勻液1 mL，沿管壁緩慢注于盛有9 mL 稀釋液的無菌試管中（注意吸管或吸頭**不要觸及稀釋液面），振搖試管或換用1 支無菌吸管反復吹打使其混合均勻，制成1:100 的樣品勻液。
6.1.4 按6.1.3 操作程序，制備10 倍系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋一次，換用1 次1 mL 無菌吸管或吸頭。
6.1.5 根據對樣品污染狀況的估計，選擇2 個～3 個適宜稀釋度的樣品勻液（液體樣品可包括原液），在進行10 倍遞增稀釋時，吸取1 mL 樣品勻液于無菌平皿內，每個稀釋度做兩個平皿。同時，分別吸取1 mL 空白稀釋液加入兩個無菌平皿內作空白對照。
6.1.6 及時將15 mL～20 mL 冷卻至46 ℃的平板計數瓊脂培養基（可放置于46 ℃±1 ℃恒溫水浴箱中保溫）傾注平皿，并轉動平皿使其混合均勻。
6.2 培養
6.2.1 待瓊脂凝固后，將平板翻轉，36 ℃±1 ℃培養48 h±2 h。水產品30 ℃±1 ℃培養72 h±3 h。
6.2.2 如果樣品中可能含有在瓊脂培養基表面彌漫生長的菌落時，可在凝固后的瓊脂表面覆蓋一薄層瓊脂培養基（約4 mL），凝固后翻轉平板，按6.2.1 條件進行培養。
6.3 菌落計數
可用肉眼觀察，必要時用放大鏡或菌落計數器，記錄稀釋倍數和相應的菌落數量。菌落計數以菌落形成單位（colony-forming units，CFU）表示。
6.3.1 選取菌落數在30 CFU～300 CFU 之間、無蔓延菌落生長的平板計數菌落總數。低于30 CFU 的平板記錄具體菌落數，大于300 CFU 的可記錄為多不可計。每個稀釋度的菌落數應采用兩個平板的平均數。
6.3.2 其中一個平板有較大片狀菌落生長時，則不宜采用，而應以無片狀菌落生長的平板作為該稀釋度的菌落數；若片狀菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均勻，即可計算半個平板后乘以2，代表一個平板菌落數。
6.3.3 當平板上出現菌落間無明顯界線的鏈狀生長時，則將每條單鏈作為一個菌落計數。
7 結果與報告
7.1 菌落總數的計算方法
7.1.1 若只有一個稀釋度平板上的菌落數在適宜計數范圍內，計算兩個平板菌落數的平均值，再將平均值乘以相應稀釋倍數，作為每g（mL）樣品中菌落總數結果。
7.1.2 若有兩個連續稀釋度的平板菌落數在適宜計數范圍內時，按公式（1）計算：
（1）式中：
N = ΣC /(n1+0.1 n2 )d
N——樣品中菌落數；
ΣC——平板（含適宜范圍菌落數的平板）菌落數之和；
n1——**稀釋度（低稀釋倍數）平板個數；
n2——**稀釋度（高稀釋倍數）平板個數；
d——稀釋因子（**稀釋度）。
示例：
稀釋度 1:100（**稀釋度） 1:1000（**稀釋度）
菌落數（CFU） 232，244 33，35
上述數據按7.2.2數字修約后，表示為25000或2.5×104。
7.1.3 若所有稀釋度的平板上菌落數均大于300 CFU，則對稀釋度*高的平板進行計數，其他平板可記錄為多不可計，結果按平均菌落數乘以*高稀釋倍數計算。
7.1.4 若所有稀釋度的平板菌落數均小于30 CFU，則應按稀釋度*低的平均菌落數乘以稀釋倍數計算。
7.1.5 若所有稀釋度（包括液體樣品原液）平板均無菌落生長，則以小于1 乘以*低稀釋倍數計算。
7.1.6 若所有稀釋度的平板菌落數均不在30 CFU～300 CFU 之間，其中一部分小于30 CFU 或大于300CFU 時，則以*接近30 CFU 或300 CFU 的平均菌落數乘以稀釋倍數計算。
7.2 菌落總數的報告
7.2.1 菌落數小于100 CFU 時，按“四舍五入”原則修約，以整數報告。
7.2.2 菌落數大于或等于100 CFU 時，第3 位數字采用“四舍五入”原則修約后，取前2 位數字，后面用0 代替位數；也可用10 的指數形式來表示，按“四舍五入”原則修約后，采用兩位有效數字。
7.2.3 若所有平板上為蔓延菌落而無法計數，則報告菌落蔓延。
7.2.4 若空白對照上有菌落生長，則此次檢測結果無效。
7.2.5 稱重取樣以CFU/g 為單位報告，體積取樣以CFU/mL 為單位報告。
附錄A
（規范性附錄）
培養基和試劑
A.1 平板計數瓊脂（plate count agar，PCA）培養基
A.1.1 成分
胰蛋白胨 5.0 g
酵母浸膏 2.5 g
葡萄糖 1.0 g
瓊 脂 15.0 g
蒸餾水 1000 mL
pH 7.0±0.2
A.1.2 制法
將上述成分加于蒸餾水中，煮沸溶解，調節pH。分裝試管或錐形瓶，121 ℃高壓**15 min。
A.2 磷酸鹽緩沖液
A.2.1 成分
磷酸二氫鉀（KH2PO4） 34.0 g
蒸餾水 500 mL
pH 7.2
A.2.2 制法
貯存液：稱取34.0 g的磷酸二氫鉀溶于500 mL蒸餾水中，用大約175 mL的1 mol/L氫氧化鈉溶液調節
pH，用蒸餾水稀釋至1 000 mL后貯存于冰箱。
稀釋液：取貯存液1.25 mL，用蒸餾水稀釋至1 000 mL，分裝于適宜容器中，121 ℃高壓**15 min。
A.3 無菌生理鹽水
A.3.1 成分
氯化鈉 8.5 g
蒸餾水 1 000 mL
A.3.2 制法
稱取8.5ｇ氯化鈉溶于1 000 mL蒸餾水中，121 ℃高壓**15 min。